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粪便样本:不同个体的粪便是由占不同百分比的胆汁、胆红素、亚铁血红素和消化了的实物组成的复杂环境。保护微生物所处原生环境是维持微生物处于静止状态的最好方法。为保护粪便样品DNA和RNA所采取的防护措施,必须以细胞不破裂,维持微生物多样性为前提。

反复冻融对微生物是有害的,解冻过程中冰晶体会促使细胞破裂。所以,避免样品反复冻融可减少不稳定菌株的损失。对于RNA的提取,反复冻融的危害更不用说。

土壤样本:壤样本,种类繁多,不尽相同。取样本的时候需要考虑取样的位置,表层还是表层一下,经纬度信息。还需要考虑取样的代表性,有五点取样法,S点取样法等减少取样的随意性,增加取样的重复性。

不同来源土壤样品,含水量,含盐量,腐殖酸含量等都会影响下游的实验操作,对于含水量高的样本,可以先离心去掉水分在保存,操作样本。

环境样本RNA提取技巧:

第一:环境样本中充满死的微生物和宿主细胞。大量降解的RNA在电泳或生物分析仪中对提取的RNA形成严重的干扰。若RNA离心柱绑定吸附过程中使用的乙醇由原来的100%降到70%,离心柱回收过程可以去除低分子量的RNA。但是,如果你对microRNA感兴趣,这个步骤还是需要继续使用100%乙醇的。

第二:提取过程中,尽快加入稳定剂是获得高质量RNA的关键。有两种稳定剂你可以加入到裂解缓冲液中。一是最常用的β巯基乙醇。β巯基乙醇是种强力还原剂,RNase有二硫键,还原剂破坏酶的空间结构致使其灭活。而是加入酚氯仿PH7-8。只要加入100ul,就可灭活核酸酶,其稳定作用。

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